История хора Трехсвятительской Церкви документально просматривается с 70-х гг. Документами служат сохранившиеся рукописные партитуры и поголосники сочинений на богослужебные тексты. Подавляющее их большинство писано одним почерком, на многих стоит подпись регента Легенького Константина Ивановича († 1981). Состав композиторов песнопений типичен для середины XX в. (много произведений А. Архангельского, несколько концертов Д. Бортнянского, А. Веделя, С. Дегтярева, задостойники П. Турчанинова и т. п.). По манере составления регентом этих поголосников и партитур можно предположить, что хор составляли в основном самодеятельные певцы. Некоторые пережили своего руководителя и еще какое-то время пели при новом регенте Владимире Курило, выпускнике Харьковской Консерватории (Института Искусств). Настоятелем тогда был протоиерей Владимир Березовский. Середина 80-х гг. была еще не очень благоприятным временем для обновления состава певчих молодыми образованными кадрами. Были случаи отчисления из институтов за участие в церковных хорах. Тем не менее в 1984–85 гг., когда руководство хором перешло к выпускнице Харьковского института искусств Светлане Курило, состав певчих полностью обновился, пополняясь в основном за счет студентов дирижерско-хоровой и вокальной кафедр института. Обновился и состав композиторов, исполняемых за богослужениями песнопений. Светлана Курило сделала большой и решительный шаг, чтобы вырваться из псевдотрадиционного плена западно-светского влияния на наше богослужебное пение. Исполнение произведений композиторов Петербургской школы свелось до минимума; их место заняли песнопения, сочиненные в стиле Синодальной (Московской) школы: А. Кастальского, П. Чеснокова, Н. Кедрова, С. Рахманинова, К. Шведова, обработки распевов и т. д. Количество певчих в лучшие для хора времена составляло 24 человека. Это иногда позволяло проявлять некоторую смелость и исполнять на богослужении, например, песнопения Вечерни из «Всенощной» С. Рахманинова. Весной 1988 г., после 70-ти летнего неблагоприятного для Церкви периода, первым из всех коллективов Харькова хор Трехсвятительского храма под управлением С. Курило дает сольные концерты церковных песнопений в г. Харькове (клуб УФТИ в Пятихатках; Дом органной и камерной музыки) и области (г. Краснокутск). Коллектив хора активно участвует в городском праздновании 1000-летия Крещения Руси. В 1989 г. по заказу Издательского отдела Московской Патриархии и при поддержке Архиепископа Харьковского и Богодуховского Иринея, хор церкви Трех святителей выпустил пластинку «Литургия св. Иоанна Златоустого» А. Никольского. В 1990 г. хор успешно участвует во II фестивале Русской Православной музыки в Москве и дает там два концерта со свежей церковно-хоровой программой. Заслуга Светланы Курило состояло не только в подборе певчих и наиболее полной раскрытии в музыке духовного начала, но и, между прочим, в воцерковлении многих участников хора, семь человек из которого в дальнейшем стали регентами. В течение всего периода регентства С. Курило настоятелем храма был протоиерей Алексей Кобзев. В связи с определенным стечением обстоятельств, в 1990 г. хор распался. С. Курило переехала в г. Александров, где также успешно регентствовала. Основная же часть хора под руководством Ирины Лазюк по приглашению протоиерея Иоанна Лизана около года работала в селе Русская Лозовая в храме Святителя Николая. Весной 1991 года о. Иоанна переводят в Благовещенский Кафедральный собор с условием служения Литургии в воскресные и праздничные дни в здании Успенского собора, который в советское время был переоборудован в Дом органной и камерной музыки. Для этих богослужений о. Иоанн пригласил свой хор, где он и встретил две Пасхи. Обстоятельства передачи здания Успенского собора Харьковской Епархии зашли в тупик, и церковные власти решили больше не совершать там богослужения. О. Иоанн продолжал служить в Благовещенском соборе, а хор периодически участвовал в вечерних богослужениях в качестве малого клироса. Вскоре весь состав хора был приглашен на работу в Александро-Невский храм его настоятелем, протоиереем Петром Козачковым. Тогда руководство хора возглавил выпускник ХИИ и бывший участник хора церкви Трех святителей Олег Рыльцов, проявивший себя церковным человеком, тонким музыкантом и талантливым аранжировщиком и композитором. За период отсутствия прежнего состава хора в храме Трех святителей, когда его настоятелем служил бывший регент Благовещенского собора протоиерей Антоний Цололо, сменилось подряд два регента, при которых дело возрождения исконной церковно-хоровой школы остановилось, а качество исполнения сильно снизилось. Наконец, в начале 1993 г. на должность руководителя хора был приглашен также бывший регент Благовещенского собора Николай Цололо (сын настоятеля). За время работы в соборе и церкви Трех святителей Н. Цололо показал себя высоким профессионалом хормейстерского искусства и хорошим музыкантом, несмотря на некоторую спорность в выборе репертуара. За время регентства Н. Цололо в храм Трех святителей из собора в 1994 г. переводят о. Иоанна Лизана на должность второго священника, после чего вскоре он становится настоятелем. В свою очередь на должность чтеца о. Иоанн приглашает и регента будничного клироса Игоря Сахно, прошедшего, начиная с 1984 г. весь путь, проделанный основной частью хора храма Трех святителей. В 1998 г. И. Сахно со своим пока еще малочисленным составом становится во главе основного клироса. Он совершенно исключает из певческого обихода какие бы то ни было композиторские сочинения и даже гармонизации, и при поддержке настоятеля о. Иоанна возвращает в богослужение живое певческое предание — церковный распев в его чистом виде. По уже успевшей сложиться традиции хора, на богослужениях используются песнопения трех основных певческих направлений Православной Церкви: Русское уставное одноголосное пение — столповой распев, Византийское пение с исократимой и грузинское церковное трехголосье. Для богослужебных нужд песнопения на греческом и грузинском языках, как правило, адаптируются к церковнославянскому тексту. Хор является лауреатом Всеукраинского фестиваля «Глас Печерский» (2001). Также полным составом он приглашался для участия в церковно-певческой конференции (Киево-Печерская лавра, 2002). Хор храма Трех Святителей по заказу Киевского «Центра Православной книги» выпустил два компакт-диска: «Древняя Всенощная. Столповой распев» (2001) и «Пение Древней Церкви. Богослужебные песнопения Византии, Иверии и Руси» (2003). Певческий коллектив активно участвует в концертно-просветительской деятельности, ознакамливая слушателей с сокровищами канонического певческого наследия Церкви.